pLVX-LexA-EGFP-CD63 質粒

產品簡介

          pLVX-LexA-EGFP-CD63，即Lentivirus expressing EGFP-CD63 fusion protein，是艾基自行研發的一種可以在大多數哺乳動物細胞(包括原代細胞和干細胞)中通過CMV啟動子表達人源CD63-EGFP融合蛋白的重組慢病毒。本產品可用于外泌體的示蹤研究，用于研究外泌體的形成、分泌、靶向和運輸機制。本產品帶有嘌呤霉素 (Puromycin)抗性基因，感染細胞后可以使用嘌呤霉素篩選穩定株。

          外泌體(Exosome)是膜包裹的細胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直徑約為40-160nm，具有脂質雙分子層結構，天然存在于血液、尿液、腦脊液，以及體外培養細胞的上清液中[1]，幾乎所有類型的細胞都可以產生并釋放外泌體[2]。如圖1所示，細胞膜內吞(Endocytosis)依次形成初級內體 (Early sorting endosome ESE)、次級內體(Late sorting endosome , LSE) 和多囊泡體(Multivesicular body, MVB) ，其中多囊泡體包含腔內囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs) 。多囊泡體與細胞膜融合形成外泌體，外泌體攜帶多種來自其母體細胞的成分(包括核酸、蛋白質、脂類和代謝物等)釋放到胞外基質中[3]。外泌體可以被附近或遠距離的細胞識別和融合，是細胞間進行相互調控的重要媒介，參與了癌癥、神經退行性病變和炎癥性疾病等多種疾病的發病過程，影響細胞多方面的的功能[4-5]。

圖1. 外泌體的形成原理及其攜帶的母體細胞成分示意圖。

          外泌體標志蛋白（Protein biomarkers for exosome），也稱外泌體蛋白標志物（Protein markers for exosome），可以用于鑒定、觀察、標記和純化外泌體。據外泌體庫 ExoCarta（http://www.exocarta.org）統計，來自不同生物、細胞類型和體液的外泌體中已發現 9769 種蛋白質，ExoCarta 列出了 100 種常見外泌體蛋白標志物（http://exocarta.org/exosome_markers_new），其中 CD9、CD63、CD81、ALIX、Flotillin、Ceramidase 和 TSG101 是最常用的外泌體蛋白標志物（如圖 2 所示）。CD63 在人體中由 CD63 基因編碼的蛋白質抗原，是跨膜四超家族（Transmembrane 4 superfamily）成員之一，為中次跨膜蛋白 [1]，大量存在于細胞外囊泡的表面，也會出現在普通的細胞膜表面。CD63 是最常用的外泌體蛋白標志物之一，被認為是調控細胞外囊泡產生和胞內物質分選的關鍵因子 [6] 。

圖2. 常見的外泌體蛋白標志物示意圖。

? pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T細胞后的表達效果如圖3所示

TU                                                          1×10^5                                                          1×10^6

圖 3. 艾基生產的pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T細胞的效果圖. 24孔板每孔100,000個細胞，

培養過夜后用相應的病毒TU數進行感染，病毒感染72小時后熒光顯微鏡實拍相同大小視野效果圖。

實際檢測效果會因檢測儀器、實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

       pLVX-LexA-EGFP-CD63質粒的主要信息如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質粒(9855bp)的圖譜如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質粒中沒有的酶切位點包括：

        AbsI, AfeI, AgeI, AhlI, AjuI, AlfI, AloI, Aor51HI, AscI, AsiGI, AsiSI, AsuII,

        BaeI, BarI, BclI, BcuI, BoxI, Bpu14I, BshTI, Bsp119I, BspT104I, BssNAI,

        Bst1107I, BstBI, BstHPI, BstPAI, BstXI, BstZ17I, CciNI, Csp45I, CspAI, Eco47III,

        EcoT22I, FbaI, FspAI, HpaI, I-CeuI, I-PpoI, I-SceI, Ksp22I, KspAI, MauBI,

        Mph1103I, MreI, MssI, NotI, NsiI, NspV, PacI, PaeR7I, PalAI, PasI, PI-PspI,

        PI-SceI, PinAI, PmeI, PshAI, PspXI, PsrI, RgaI, SbfI, SdaI, SfaAI, SfiI,

        Sfr274I, SfuI, SgfI, SgrAI, SgsI, SlaI, SmiI, SpeI, SrfI, Sse8387I, SwaI, XbaI,

        XcmI, XhoI, Zsp2I

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質粒單酶切位點包括：

        AhdI, ApaI, AvrII, BamHI, BfuAI, BlpI, BmgBI, BmtI, BsaBI, BsiWI, BspDI, BspMI,

        BsrGI, BstEII, Bsu36I, ClaI, CsiI, DrdI, EcoRI, FseI, FspI, KflI, MfeI, MluI,

        NdeI, NheI, NruI, PaqCI, PflFI, PpuMI, PspOMI, PstI, PvuI, RsrII, SexAI, SgrDI,

        SmaI, SnaBI, SphI, SspI, TspMI, Tth111I, XmaI

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質粒推薦使用的測序引物序列如下：

        CMV-F primer (2659-2679): 5'-CgCAAATgggCggTAggCgTg-3'

        pLVX-LexA-EGFP-CD63的全序列信息請參考艾基網站上該質粒的信息。

包裝清單

保存條件

        -80oC保存。

注意事項

        本質粒未經艾基書面許可不得用于任何商業用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。

          本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

        為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1. 首次使用1μg包裝的本產品時，請先取少量本質粒轉化大腸桿菌，進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質?？梢酝ㄟ^酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。

2. 100μg包裝的本產品質粒濃度為0.25μg/μl，共400μl。可以直接用于轉染細胞。